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選擇緩沖液的原則了解
更新時間:2018-11-27 點擊次數(shù):1741次
緩沖液通常是由「弱酸及其共軛堿」或「弱堿及其共軛酸」緩沖對所組成的溶液,能夠在加入一定量其他物質(zhì)時減緩pH的改變。以生物實驗中常用的一種緩沖液PBS為例,是由Na2HPO4、KH2PO4組成的緩沖對,在PH5.8-8.0范圍內(nèi)有較強的緩沖能力。
為了保證緩沖液有足夠強的緩沖能力,在配制緩沖液時,需要做到:
1)為使共軛酸堿對的濃度比接近于1,應(yīng)根據(jù)所需要維持的pH范圍選擇合適的緩沖對,使其中的弱酸的PKa等于或接近于所要求的pH,例如,生物培養(yǎng)液中需用PH=7.0的緩沖液,已知H2PO4-的pKa2=7.21,因此,H2PO4—HPO42-是可以選擇的合適的緩沖對。如若配制PH=9.0的緩沖液,則可選擇NH3·H2O-NH4Cl緩沖對(pKa(NH4+)=9.25)??梢娙跛岬腒a是選擇緩沖液的主要依據(jù),表中列出了幾種常用的緩沖液。
選擇緩沖液的一般原則:
避免緩沖液與蛋白質(zhì)之間的不良反應(yīng)
使用低濃度避免費特異性離子強度的干擾
緩沖液的pKa變化超過一個pH單位緩沖能力明顯下降
混合緩沖液在一定強度下往往有更寬的緩沖范圍
大多數(shù)動物細胞在37℃的生理狀況下pH為7.0~7.5,而在溫度下降到0℃時可達到8.0
要根據(jù)選用的分離方法選擇緩沖液:對于凝膠過濾,大多數(shù)緩沖液均適用,對于陰離子交換層析,陽離子緩沖液Tris緩沖液,對于陽離子交換和羥基磷灰石層析,陰離子緩沖液磷酸鹽緩沖液。
為了保證緩沖液有足夠強的緩沖能力,在配制緩沖液時,需要做到:
1)為使共軛酸堿對的濃度比接近于1,應(yīng)根據(jù)所需要維持的pH范圍選擇合適的緩沖對,使其中的弱酸的PKa等于或接近于所要求的pH,例如,生物培養(yǎng)液中需用PH=7.0的緩沖液,已知H2PO4-的pKa2=7.21,因此,H2PO4—HPO42-是可以選擇的合適的緩沖對。如若配制PH=9.0的緩沖液,則可選擇NH3·H2O-NH4Cl緩沖對(pKa(NH4+)=9.25)??梢娙跛岬腒a是選擇緩沖液的主要依據(jù),表中列出了幾種常用的緩沖液。
選擇緩沖液的一般原則:
避免緩沖液與蛋白質(zhì)之間的不良反應(yīng)
使用低濃度避免費特異性離子強度的干擾
緩沖液的pKa變化超過一個pH單位緩沖能力明顯下降
混合緩沖液在一定強度下往往有更寬的緩沖范圍
大多數(shù)動物細胞在37℃的生理狀況下pH為7.0~7.5,而在溫度下降到0℃時可達到8.0
要根據(jù)選用的分離方法選擇緩沖液:對于凝膠過濾,大多數(shù)緩沖液均適用,對于陰離子交換層析,陽離子緩沖液Tris緩沖液,對于陽離子交換和羥基磷灰石層析,陰離子緩沖液磷酸鹽緩沖液。
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